Jurnal Percobaan - 08 Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom

JURNAL PRAKTIKUM

KIMIA ORGANIK I

Penyusun

Novela Melinda (A1C117007)

Dosen Pengampu

Dr. Drs. Syamsurizal, M.Si

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA

JURUSAN PENDIDIKAN MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

FAKULTAS KEGURUAN DAN ILMU PENDIDIKAN

UNIVERSITAS JAMBI

2019

Percobaan - 08

I. Judul

Kromatografi Lapis Tipis dan Kolom

II. Hari, Tanggal

Sabtu, 13 April 2019

III. Tujuan

Adapun tujuan dilakukannya praktikum adalah :

1. Untuk mengetahui pengertian Kromatografi

2. Untuk mengetahui Azas penting dalam kromatografi

3. Untuk mengetahui kelebihan kromatografi lapis tipis

IV. Landasan Teori

Sebuah komponen dalam suatu zat berada dalam perbedaan afinitas atau gaya Desi untuk setiap jenis sampelnya di sebuah asa diam dan asa gerak merupakan sebuah prinsip dari kromatografi. Hingga setiap komponen tersebut saling menyusun satu sama lain.  Dimana afinitas di sini ditentukan oleh sampel yang dipakai berdasarkan kekuatan menyerapnya terhadap asa diam serta kemampuan melarut dalam asa geraknya.  Semakin besar kekuatan sampel dalam menyerap asa diamnya serta semakin kecil kemampuannya melarut dalam fasa geraknya maka waktunya di dalam sembah kolom akan lebih lama dibandingkan dengan sampel yang memiliki daya serap atau absorpsi yang lemah terhadap fasa diamnya serta daya larutnya tinggi di dalam fasa geraknya (http://syamsurizal.staff.unja.ac.id/2019/04/10/325teknik-pemisahan-dengan-khromatografi/).

Berdasarkan fase diam dan gerak, senyawaan dapat dipisahkan dalam komponen-komponennya pada teknik kromatografi. Azas dari kromatografi adalah setiap senyawa akan mempunyai koefisien distribusi berbeda pula tara fase diam dan geraknya. Senyawa yang memiliki kemampuan berinteraksi lemah dengan fase geraknya maka dia akan mengendap pada fase geraknya serta dalam sistem kromatografi pun juga bergerak dengan cepat. Sebaliknya, senyawa yang dapat berinteraksi aktif dengan fase diamnya akan bergerak lambat dalam sistem. Setiap komponen dalam sebuah senyawa campuran memiliki kecepatan gerak yang berbeda-beda sehingga akan dapat memisah dengan sempurna dalam kromatografi. Kegunaan dari metode kromatografi adalah untuk mengukur analisis kualitatif maupun kuantitatif. Dalam kromatografi ada istilah preparatif yang artinya pemisahan sampel untuk lingkup yang besar sehingga pemisahan tersebut dapat digunakan secara kontinu (Tim Kimia Organik, 2016).

Menurut Soebagio (2010), kecenderungan dalam kromatografi antara lain :

a. Setiap molekul dalam sebuah komponen senyawa memiliki kecenderungan untuk larut dalam suat zat cair.

b. Setiap molekul dalam sebuah komponen senyawa memiliki kecenderungan untuk menempel pada suatu zat berbentuk padat yang permukaannya halus (adsorpsi = penyerapan).

c. Setiap molekul dalam sebuah komponen senyawa memiliki kecenderungan untuk saling bertukar ion yang disebut sebagai reaksi kimia.

Sebuah komponen yang akan di lakukan pemisahan harus memenuhi syarat yaitu mampu berinteraksi dengan fasa diamnya serta dapat larut di dalam fasa geraknya. Cara berinteraksi di dalam asa diam yaitu melarut di dalamnya, mampu teardsorpsi di dalamnya, maupun bertukar ion atau bereaksi secara kimia. Pemisahan sampel dalam kromatografi dikelompokkan berdasarkan beda migran antara zat-zat yang menyusun sampel. Hasil akhir dari kromatografi berguna untuk analisis kualitatif, analisis kuantitatif, serta juga digunakan untuk preparatif sampel. Persamaan antara kromatografi lapis tipis (KLT) dan kromatografi kertas yaitu pada cara melakukan pemisahannya. Kemudian perbedaannya terletak pada media yang digunakan dalam pemisahan, yaitu lapis tipis adsorben halus yang terdapat pada papan kaca, alumunium atau plastik untuk menggantikan kertas. Lapis tipis absorben ini berada pada asa diam.

Cara penotolan sampel KLT yaitu menggunakan pipa kecil yang disebut pipa kapiler. Kemudian ditunggu hingga sampel kering, setelah itu dimasukkan ke dalam sebuah bejana. Kemudian diamati asa geraknya. Bila asa tersebut bergerak mencapai batas atas maka diangkat dan dibiarkan plat menjadi kering. Noda yang telah mengering itu diamati dibawah sinar lampu UV 254nm dan 366nm. Kromatografi KLT ini digunakan untuk mengamati pola yang terbentuk pada noda.  Bila noda tersebut sama, maka digabungkan sehingga diperolehlah isolat sederhana. Kromatografi jenis ini adalah teknik memisahkan komponen campuran dengan melibatkan partisi suatu senyawa di antara absorben yang terdapt pada suatu plat kaca dari alumunium pada sebuah pelarut yaitu sebagai asa geraknya yang mengalir melalui padatan penyerap atau adsorbennya (Mutmainnah, 2017).

Kelebihan dari metode kromatografi lapis tipis tipe densitometri yaitu : spesifisitasnya tinggi, bisa dipercaya, prosesnya mudah, membutuhkan waktu sedikit, biaya akomodasi murah, membutuhkan waktu singkat dalam mengubah kepolaran pelarut atau pelarut campuran, serta kadar pelarut yang dibutuhkan sedikit. Silika gel yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis dapat didaur ulang. Jika dibandingkan dengan KCKT, tentu KLT lebih unggul dalam prosesnya yang lebih mudah dan murah dan alat yang digunakan juga lebih sederhana. KLT dalam pemilihan fase geraknya lebih fleksibel dibanding KCKT, kemudian untuk optimasi pemisahannya juga memiliki beragam pilihan, proses kromatografi lebih mudah dilakukan dan juga sampel dapat memisah dengan waktu bersamaan sehingga sampel dapat dideteksi dengan mudah. Selain itu, dalam KCKT, pendeteksi sampel bersifat dinamis sedangkan KLT bersifat statis. Pada KLT juga dapat dengan mudah mengubah atau menambahkan eluenagar sensitivitas serta selektivitasnya meningkat tanpa limit waktu. Di mana ini bekerja pada sistem dinamis seperti halnya KCKT ( Wulandari, dkk, 2013).

V. Alat dan Bahan

5.1 Alat

a. Pelat Kaca Kecil

b. Kertas Saring

c. Pita Selotip

d. Gelas Piala

e. Batang Pengaduk

f. Pipa Gelas Kapiler

g. Pelat TLC Kecil

h. Bejana Pengembang

i. Tabung Reaksi

j. Kolom Kromatografi

k. Piper Tetes

l. Pensil Lunak

m. Bejana pengembang

5.2 Bahan

a. Air

b. Metanol

c. Etanol

d. Kloroform

e. Etil-asetat

f. n-heksana

g. Serium Sulfat 

h. Suspensi Silika Gel

i. Larutan zat Autentik

j. Larutan Pengambang

k. Contoh Daun

l. Larutan Sampel

m. Aseton

VI. Prosedur Kerja

6.1 Kromatografi Lapis Tipis

a. Siapkan Plat TLC

b. Dibuat larutan pengembang dalam gelas piala 1L  dengan komposisi Etanol : Metanol : Kloroform : Etil- Asetat : n-heksan : Aseton ( 40 : 68 : 108 : 115 : 140 : 152 ) ml

c. Dibuat 10 larutan sampel daari 10 ekstrak tanaman dengan 5 ml metanol

d. Masing- masing diambil larutan sampel yang sudah di ekstrak dibubuhkan ( ditotolkan ) diatas pelat TLC dengan jarak kira-kira 1cm dari tepi pelat kaca.

e. Keringkan noda sampel dan standard dengan dryer (ditiup)

f. Masukkan pelat ke dalam bejana pengembang

g. Biarkan proses ini berlangsung sampai garis dmencapai 1 cm dari tepi atas pelat

h. Angkat pelat dari bejana, lihat noda dengan lampu UV atau dibuat larutan dengann serium sulfat

i. Hitung dan bandingkan semua Rf yang diperoleh.

6.2 Kromatografi Kolom

a. Siapkan 10 ekstrak daun

b. Siapkan kolom kromatografi

c. Sumbat bagian bawah kolom dengan glass wool

d. Dimasukkan silika gel kedalam larutan pengembang yang telah dibuat di awal

e. Larutan tersebur kemudian dimasukkan kedalam kromatografi kolom

f. Dimasukkan sampel yang akan di kromatografi

g. Pelarut harus terus- menerus diteteskan kedalam kolom

h. Tetesan yang keluar dari kolom ditampung dengan beberapa tabung reaksi bersih dan dipisahkan berdasarkan warnanya.

Berikut link video mengenai kromatografi kolom https://www.youtube.com/watch?v=1Nbhnt9llGQ&t=24s dimana akan berkaitan dengan pertanyaan dibawah ini.

VII. Pertanyaan Pra Praktikum

1. Berdasarkan video di atas bagaimana langkah prosedur tahap ke lima?
2. Berdasarkan video di atas, apa tujuan membungkus tutup corong pisah menggunakan alumunium foil?
3. Apa prinsip kerja dari kromatografi kolom?